細(xì)胞線粒體膜電位檢測

實驗原理

細(xì)胞線粒體膜電位檢測（JC-1）是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細(xì)胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當(dāng)JC-1 濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在，激發(fā)波長為527nm，呈綠色熒光；當(dāng)JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時，形成聚合物，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長為590nm。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。

實驗流程

1. 細(xì)胞培養(yǎng)；

2. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時設(shè)立陰性依照組合陽性對照組，收集細(xì)胞；

3. 用PBS洗滌細(xì)胞三次，收集不多于1×106的細(xì)胞；

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL**去離子水稀釋成1×Incubation Buffer，混勻并預(yù)熱至37℃；

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，渦旋混勻配成JC-1工作液；

6. 取500 μL JC-1工作液將細(xì)胞均勻懸浮，37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。

7. 室溫離心（2000rpm,5min）收集細(xì)胞，用1×Incubation Buffer洗兩次；

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細(xì)胞；

9. 流式細(xì)胞儀檢測，分析。

客戶提供

細(xì)胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細(xì)胞)，相關(guān)藥品或MMP檢測試劑盒（可代購）

公司提供

實驗步驟、結(jié)果圖、數(shù)據(jù)結(jié)果和分析報告

實驗周期：1-2周，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長情況及實驗內(nèi)容而定。

伊萊博生物擁有豐富的研究經(jīng)驗，具備完善的系統(tǒng)化管理能力和科研服務(wù)體系。目前已自建細(xì)胞、分子、病理等實驗平臺近1000平方米，擁有的儀器設(shè)備、細(xì)胞庫、樣本保存庫等。動物實驗中心近1800平方米，可滿足同時飼養(yǎng)清潔級和SPF級動物。核心實驗技術(shù)團隊主要來自大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)等重點高校及科研機構(gòu)，能夠為客戶提供研究方案策劃、項目實施及項目深度分析等方面的技術(shù)支持。公司目前參與研究項目已經(jīng)涵蓋心腦血管、腫瘤、內(nèi)分泌、生殖、免疫、神經(jīng)等諸多領(lǐng)域。