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原代細(xì)胞分離純化

原代細(xì)胞分離純化

簡要描述:
原代細(xì)胞來源于胚胎、組織器官及外周血,是經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞。原代細(xì)胞分離純化是細(xì)胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)。

更新時間:2023-10-30

訪問量:1570

廠商性質(zhì):其他

單個細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)(細(xì)胞克隆技術(shù)),即從細(xì)胞群體中分離出一個細(xì)胞,并使其在體外培養(yǎng)體系中能繁殖成新的細(xì)胞群體,這種由單個細(xì)胞所形成的細(xì)胞群(或集落)稱為一個克隆,這種純化后的細(xì)胞群體稱為細(xì)胞株。有以下5種常采用的方法:毛細(xì)管克隆法、有限稀釋克隆法、平皿克隆分離法、軟瓊脂克隆分離法、單細(xì)胞顯微克隆法。

細(xì)胞的純化

細(xì)胞的純化分為自然純化和人工純化,主要采用以下5種方法:

1.細(xì)胞因子依賴純化法:加入某些特殊的細(xì)胞因子從而使細(xì)胞達(dá)到純化,但是此方法有依賴性,加入之后每次培養(yǎng)細(xì)胞都需要因子培養(yǎng)。

2.酶消化法:利用上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對胰蛋白酶的耐受性不同,達(dá)到純化的目的。此方法也可對貼壁細(xì)胞與半貼壁及粘附細(xì)胞間的分離純化。

(1)上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的分離純化

需要在胰蛋白酶的作用下,讓成纖維細(xì)胞先脫壁,從而得到上皮細(xì)胞。

(2)骨髓基質(zhì)肌樣細(xì)胞的純化

同樣適用酶消化法使粘附細(xì)胞脫壁分離,讓骨髓基質(zhì)細(xì)胞或血液中肌樣細(xì)胞與淋巴細(xì)胞分開和純化。

3.反復(fù)貼壁法

成纖維細(xì)胞其貼壁過程快,能在短時間內(nèi)完成附著過程,而上皮細(xì)胞在短時間內(nèi)不能附著或附著不穩(wěn)定,稍加振蕩即浮起,利用此差別可以純化細(xì)胞。

4.電烙篩選法

貼壁細(xì)胞在轉(zhuǎn)化時,細(xì)胞層中會出現(xiàn)分散的轉(zhuǎn)化灶,細(xì)胞密集、排列規(guī)則,有明顯生長趨勢,與周邊未能轉(zhuǎn)化的細(xì)胞有明顯的區(qū)域界限,可用機(jī)械刮除法去除或用電烙篩選法燙死未轉(zhuǎn)化細(xì)胞而保留轉(zhuǎn)化灶細(xì)胞。

5.機(jī)械刮除法

此方法去除不需要的細(xì)胞區(qū)域而保留需要的細(xì)胞區(qū)域,適用于上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分離純化。

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