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脾單核細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)

脾單核細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)

簡要描述:
脾單核細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)是伊萊博生物細(xì)胞平臺的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一,由專業(yè)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員操作完成。

更新時(shí)間:2023-10-30

訪問量:1385

廠商性質(zhì):其他

脾單核細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)操作方法:

采用頸椎脫臼法處死小鼠,于75%的酒精中浸泡10-15min;
在無菌超凈臺內(nèi)分離脾臟,放入PBS溶液(按照1:50的比例加入雙抗)中清洗2遍;
將清洗后的脾臟組織轉(zhuǎn)移至離心管中,加入適量的RMPI-1640培養(yǎng)基,用剪刀將其剪碎成糜狀;
將剪碎后的組織經(jīng)200目的濾網(wǎng)過濾,得到脾細(xì)胞懸液;
另取一個(gè)離心管,先加入與細(xì)胞懸液等量體積的淋巴細(xì)胞分離液,之后將細(xì)胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細(xì)胞分離液上層(注意45度傾斜沿管壁滴加,一定要緩慢否則懸液沉下去導(dǎo)致分層界面不明顯);
3000rpm離心10min,離心完畢后吸取中間白膜層即為脾單個(gè)核細(xì)胞;
3000rpm離心10min,加入RMPI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌一次;
用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞;3000rpm離心10min,再次用RMPI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌一次;
洗滌結(jié)束后,所得細(xì)胞沉淀用RMPI-1640培養(yǎng)基重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

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