流式單標步驟通常包括以下幾個關(guān)鍵環(huán)節(jié)：

細胞樣品的準備。首先，需要收集目標細胞樣品，如細胞懸液或組織細胞液，以獲得細胞單層的懸浮液。然后，用PBS洗滌細胞樣品，以去除細胞培養(yǎng)基中的細胞培養(yǎng)液和廢棄物。¹

 制備單標熒光染色試劑。科研人員選擇的單標熒光染色試劑是一種粘附于目標細胞表面的抗體探針，這些抗體可以特異性地與目標抗原結(jié)合，并發(fā)出熒光信號。常用的單標染色試劑有FITC（熒光素異硫氰酸酯）、PE（葡萄糖相映射學(xué)）等。

染色反應(yīng)。將制備好的單標染色試劑加入之前準備好的細胞樣品中，進行充分的染色反應(yīng)。染色結(jié)束后，用PBS洗滌細胞樣品，以去除未結(jié)合的熒光抗體。

 流式細胞儀分析。使用流式細胞儀對染色實驗進行分析，得到關(guān)于細胞表面抗原的熒光信號。流式細胞儀可以通過激光照射懸浮細胞，檢測細胞表面與標記抗體結(jié)合的熒光強度。通過流式細胞儀的檢測系統(tǒng)，可以同時分析多個參數(shù)，如細胞大小、熒光染色強度和細胞表面抗原的表達水平。²

 數(shù)據(jù)分析與報告。通過流式細胞儀獲得的原始數(shù)據(jù)可以使用不同的軟件進行分析，如FlowJo、Kalisto和Cytobank。這些軟件可以檢測和計算細胞表面抗原的表達水平，并生成圖形和統(tǒng)計結(jié)果。

這些步驟確保了流式單標實驗的準確性和可靠性。