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肺炎感染模型構(gòu)建
更新時(shí)間：2025-06-23
訪問(wèn)量：213
廠商性質(zhì)：其他
一、肺炎感染模型構(gòu)建選擇依據(jù)
病原體類型
細(xì)菌：肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）
病毒：流感病毒（H1N1）、SARS-CoV-2（需hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠）
真菌：煙曲霉（Aspergillus fumigatus）
研究目標(biāo)
急性感染（3-7天） vs 慢性感染（2-4周）
局部肺炎 vs 全身性播散
肺炎感染模型構(gòu)建:
二、細(xì)菌性肺炎模型（以肺炎鏈球菌為例）
1. 材料準(zhǔn)備
菌株：臨床分離株或ATCC標(biāo)準(zhǔn)株（如ATCC 6303）
動(dòng)物：C57BL/6或BALB/c小鼠（6-8周齡）
培養(yǎng)基：血瓊脂平板、Todd-Hewitt肉湯
2. 操作步驟
細(xì)菌培養(yǎng)：
接種菌株至血瓊脂平板，37℃ 5% CO?培養(yǎng)16-18小時(shí)。
挑取單菌落接種至Todd-Hewitt肉湯，震蕩培養(yǎng)至OD600=0.5（約1×10^8 CFU/mL）。
感染前處理：
離心收集細(xì)菌，PBS洗滌2次，重懸于無(wú)菌PBS（濃度根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整，通常1×10^6-10^7 CFU/50 μL）。
氣管內(nèi)滴注感染：
麻醉小鼠（異fu烷），垂直固定，用套管針插入氣管，緩慢注入50 μL菌液。
立即旋轉(zhuǎn)小鼠使菌液均勻分布。
3. 關(guān)鍵參數(shù)
劑量：1×10^6 CFU/小鼠（致死率約50%）
觀察時(shí)間點(diǎn)：24h（早期炎癥）、72h（峰值期）、7天（恢復(fù)期）
三、病毒性肺炎模型（以流感病毒H1N1為例）
1. 材料準(zhǔn)備
病毒株：A/Puerto Rico/8/34 (PR8)
動(dòng)物：野生型C57BL/6小鼠
細(xì)胞：MDCK細(xì)胞（病毒擴(kuò)增用）
2. 操作步驟
病毒擴(kuò)增與滴定：
接種病毒至MDCK細(xì)胞，48h后收集上清，測(cè)定TCID50（50%組織培養(yǎng)感染劑量）。
鼻內(nèi)接種：
麻醉小鼠，仰臥位固定，用微量移液器滴注50 μL病毒液（1×10^3 TCID50）于鼻腔。
保持小鼠仰臥1分鐘確保吸入。
3. 關(guān)鍵參數(shù)
劑量：1×10^3 TCID50（導(dǎo)致體重下降15-20%）
觀察指標(biāo)：
每日體重變化（下降≥20%需安樂(lè)si）
肺組織病毒載量（qPCR檢測(cè)NP基因）
四、真菌性肺炎模型（以煙曲霉為例）
1. 材料準(zhǔn)備
菌株：煙曲霉臨床分離株（分生孢子濃度≥1×10^8/mL）
動(dòng)物：免疫抑制小鼠（環(huán)lin酰胺150 mg/kg預(yù)處理）
2. 操作步驟
孢子制備：
培養(yǎng)真菌于PDA平板，25℃ 5天，用0.05% Tween-80 PBS收集孢子，過(guò)濾去除菌絲。
氣管內(nèi)接種：
麻醉后注入50 μL孢子懸液（1×10^5-10^6孢子/小鼠）。
3. 關(guān)鍵參數(shù)
免疫抑制：環(huán)lin酰胺預(yù)處理72h后再感染
病理特征：Grocott染色觀察肺組織菌絲侵襲
五、表型驗(yàn)證方法
| 檢測(cè)指標(biāo) | 技術(shù)方法 | 預(yù)期結(jié)果 |
|---|---|---|
| 病原體載量 | 肺勻漿CFU計(jì)數(shù)（細(xì)菌/真菌） | 感染組顯著高于對(duì)照組 |
| 病毒RNA | qPCR（如流感病毒NP基因） | 感染后3天達(dá)峰值 |
| 炎癥損傷 | 肺組織HE染色 | 肺泡壁增厚、炎性細(xì)胞浸潤(rùn) |
| 細(xì)胞因子 | BALF ELISA（TNF-α、IL-6） | 促炎因子水平升高 |
| 肺功能 | 全身體積描記法（Penh值） | 氣道阻力增加 |
六、注意事項(xiàng)
生物安全：
病毒操作需在BSL-2實(shí)驗(yàn)室，SARS-CoV-2需BSL-3。
劑量?jī)?yōu)化：
預(yù)實(shí)驗(yàn)確定LD50（細(xì)菌）或ID50（病毒），避免過(guò)度致死。
感染均一性：
氣管滴注時(shí)確保小鼠呼吸平穩(wěn)，避免誤入食管。
模型局限性：
小鼠與人類肺部解剖差異（如無(wú)咳嗽反射），需謹(jǐn)慎解讀結(jié)果
